- Resume
- Listeria monocytogenes
- Escheria coli
- Salmonella
- Helicobacter pylori / klinické skúšky
- Antifungálna aktivita
Zhrnutie štúdie pre Lactobacillus Bulgaricus GLB44
Baktérie sú najbežnejšou formou života na planéte Zem. Baktérií, nachádzajúcich sa v našom tele a/alebo na tele, je desaťkrát viac ako buniek tvoriacich ľudské telo a hrajú dôležitú úlohu pri udržiavaní nášho zdravia. Tieto „dobré“ baktérie nám poskytujú živiny, zabraňujú množeniu patogénnych alebo „zlých“ baktérií v tele a napomáhajú normálnemu vývoju nášho imunitného systému. Mnoho z týchto „dobrých“ baktérií patrí do skupiny takzvaných laktobacilov. Potraviny, ktoré jeme, voda, ktorú pijeme, a dokonca aj vzduch, ktorý dýchame, obsahujú baktérie, ktoré dopĺňajú „dobré“ baktérie, ktoré žijú v / na našom tele. Väčšina ľudí vie iba o baktériách, ktoré spôsobujú infekcie, zatiaľ čo baktérie podporujúce naše zdravie zostávajú pre širokú verejnosť menej známe. Ukázalo sa, že určité „dobré“ baktérie sú schopné inhibovať rast ďalších, škodlivejších baktérií. Početné vedecké štúdie sa zaoberali týmito pomocnými alebo probiotickými baktériami. Probiotické baktérie sú obsiahnuté v mnohých potravinách, ktoré konzumujeme, napríklad v jogurtoch. Cieľom je doplniť baktérie v tele a zabezpečiť nám tak lepšie zdravie. Úrad pre potraviny a liečivá vyžaduje, aby sa vo fermentovaných mliečnych výrobkoch nachádzali určité kmene „dobrých“ baktérií, ako napríklad Lactobacillus Bulgaricus, aby sa im dalo nazvať „jogurt“.
Podľa posledných výskumov je probiotická aktivita špecifická pre rôzne kmene baktérií, ktoré sú často súčasťou skupiny nazývanej Lactobacillus. V našom laboratóriu sme hodnotili inhibičné účinky probiotického kmeňa Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 s použitím organického džúsu. Výrobky zvyčajne obsahujú rôzne druhy baktérií, potrebných na fermentáciu a niektoré z nich môžu byť pre človeka škodlivé. Testovali sme, či pridanie tohto probiotického bakteriálneho kmeňa potláča alebo ničí potenciálne patogény. Počas týchto štúdií sme pridali probiotický kmeň Lactobacillus delbrueckli subsp. ´Baktéria by dokázala potlačiť „zlé“ baktérie vrátane tých, ktoré sú najčastejšie spojené s chorobami prenášanými potravinami, ako sú listéria, Escherichia coli, salmonella a shigella, ktoré sa nachádzajú v nesprávne pripravených alebo vyčistených potravinách . Výsledky ukázali, že Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 je schopný znížiť rast potenciálne škodlivých baktérií spôsobujúcich choroby u ľudí. Výsledky vo väčšine prípadov ukazujú, že zníženie počtu „zlých“ baktérií je viac ako 99%.
Široký rozsah účinku Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 je medzi druhmi Lactobacillus neobvyklý, čo naznačuje, že existujú špecifické bunkové komponenty, ktoré môžu vysvetľovať túto činnosť. Schopnosť jedného organizmu inhibovať rast iného organizmu je výsledkom bielkovinových látok nazývaných bakteriocíny. Takéto zlúčeniny sú v prírode bežné, ale zvyčajne sú zamerané na špecifické kmene iných baktérií, ktoré súťažia o živiny s probiotickými baktériami v prírodnom prostredí, ako je gastrointestinálny trakt. Z tohto dôvodu je nezvyčajné nájsť jediný kmeň Lactobacillus, ktorý vyvoláva inhibičný účinok na širokú škálu škodlivých baktérií, pretože tieto baktérie by sa zriedka dali zistiť súčasne v rovnakom prírodnom prostredí. Pokračujeme v hodnotení inhibičných vlastností tohto kmeňa, ako aj v testovaní pozitívneho účinku pridania Lactobacillus delbrueckli subsp. Bulgaricus G-LB-44 v rôznych potravinárskych výrobkoch. Vzhľadom na to, že tento poddruh Lactobacillus bulgaricus sa bezpečne používa v potravinách viac ako 100 rokov bez známok predávkovania alebo vedľajších účinkov, domnievame sa, že ak sa pridá do nepasterizovanej šťavy, môže slúžiť ako prírodný konzervačný prostriedok. by dokázala potlačiť „zlé“ baktérie a zvýšiť tak množstvo prospešných a zdravých baktérií v tele.
S pozdravom Andrew Onderdonck
Test inhibície patogénu
Účel:
Preukázať, či Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje rast Listeria Monocytogenes v mrkvovej šťave.
Skúšobné materiály:
1. Lyofilizovaná baktéria Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (živé baktérie v práškovej forme – 1 x 109 / rok, dodáva K. Petkov) 2. Mrkvová šťava (bulharskú produkciu poskytla 6. 5. 2014 K. Petkov) 3. Plakety s trypsínový sójový agar s 5% ovčej krvi – Petriho misky s trypsínovým sojovým agarom a s 5% ovčej krvi. 4. Listeria Monocytogenes – ATCC BAA – 751 5. Listeria Monocytogenes – BWH 432
Bakteriálne inokulum
Listeria Monocytogenes ATC BAA – 751 Na tieto experimenty sa použili vopred pripravené zmrazené bunkové kultúry Listeria Monocytogenes BAA – 751. Bakteriálna koncentrácia bola 9,9 x 108 / ml. Pre kontrolné a testovacie vzorky Listeria Monocytogenes BAA – 751: Zmrazená skúmavka obsahujúca Listeria Monocytogenes BAA – 751 bola vybratá z mrazničky a ponechaná rozmraziť pri izbovej teplote. Baktérie sa zriedili (1: 10 000) v sterilnom fosfátom pufrovanom soľnom roztoku, aby sa dosiahla koncentrácia približne 9,9 x 104 / ml. 5 ul zriedeného materiálu sa pridalo k 5 ml každej z testovaných vzoriek, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 102 / ml.
Listeria Monocytogenes – BWH 432 Na tieto experimenty sa použili vopred pripravené zmrazené bunkové kultúry Listeria Monocytogenes – BWH 432. Bakteriálna koncentrácia je 1,68 x 109 / ml. Pre kontrolné a testovacie vzorky Listeria Monocytogenes – BWH 432: Zmrazená skúmavka obsahujúca Listeria Monocytogenes – BWH 432 bola vybratá z mrazničky a ponechaná rozmraziť pri izbovej teplote. Baktérie sa zriedili (1: 100 000) v sterilnom fosfátom pufrovanom soľnom roztoku, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1,68 x 104 / ml. 30 ul zriedeného materiálu sa pridalo k 5 ml každej z testovaných vzoriek, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 102 / ml.
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44
1 gram Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 sa pridal do 9 ml sterilnej vody pri izbovej teplote. Roztok sa miešal 5 minút, aby sa zabezpečila homogenita zmesi. 0,05 ml alebo 0,5 ml pripraveného roztoku sa pridalo k 5 ml vzorky.
Skúšobný postup:
S pozdravom Andrew Onderdonck
Test inhibície patogénu
Účel:
Preukázať, či Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje rast Escherichia coli v zeleninovej šťave.
Skúšobné materiály:
1. Lyofilizovaná baktéria Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (živé baktérie v práškovej forme – 1x 109 / g) 2. Zeleninová šťava (3 fľaše džúsu „Juice Press Organic Complete Source, každá 17 tekutých uncí“ 3. Doštičky so sójovým agarom- petriho misky so sojovým agarom, trypsín. Escherichia coli – ATCC 25922
Bakteriálne inokulum
Escherichia coli. Pre tieto experimenty sa použili vopred pripravené, zmrazené bunkové kultúry Escherichia coli. Koncentrácia baktérií je 1,32 x 109 / ml.
Pre kontrolné a testovacie vzorky Escherichia coli: Zmrazená skúmavka obsahujúca Escherichia coli. sa vybrala z mrazničky a nechala sa roztopiť pri izbovej teplote. Baktérie sa zriedili (1: 10 000) v sterilnom fosfátom pufrovanom soľnom roztoku, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 105 / ml. 50 ul zriedeného materiálu sa pridalo do každej z testovaných vzoriek, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 102 / ml. Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 2 gramy Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 sa pridal k 18 ml sterilnej vody pri teplote miestnosti. Roztok sa miešal 5 minút, aby sa zabezpečila homogenita zmesi. Do každej z testovaných vzoriek sa pridalo 0,5 ml pripraveného roztoku.
Skúšobný postup:
Nasledujúce testovacie vzorky boli pripravené pre Escherichia coli.
Kontrolné vzorky: 5 fliaš, každá s obsahom 50 ml zeleninovej šťavy
Testovacie vzorky: 5 fliaš, každá s obsahom 50 ml varenej zeleninovej šťavy, plus Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus. Escherichia coli sa pridala ku kontrolným a testovacím vzorkám opísaným vyššie. Všetky vzorky sa umiestnili na 24 hodín do chladničky (4 ° C). Po ochladení sa potvrdila bakteriálna koncentrácia v každej zo vzoriek. Uskutočnilo sa desať zriedení v sterilnom fosfátom pufrovanom soľnom roztoku. Násobok 0,1 ml pre každé zriedenie.
stôl 1
S pozdravom Andrew Onderdonck
Test inhibície patogénu
Účel:
Preukázať, či Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 inhibuje rast rôznych koncentrácií (1 x 105 / ml, 1 x 103 / ml) Salmonella Tifimurium v mrkvovej šťave.
Testované materiály: 1. Lyofilizovaná baktéria Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (prášok CFU 1 x 109 / g, získaný 6. 5. 2014 K. Petkovom) 2. Mrkvová šťava 3. Plaky so sójovým agarom trypsín – petriho misky so sojovým agarom, trypsín. Salmonella Tifimurium – klinicky izolovaná
Bakteriálne inokulum
Salmonella Tifomurium
Pre tieto experimenty sa použili vopred pripravené, zmrazené bunkové kultúry Salmonella Tifimurium. Koncentrácia baktérií je 5,5 x 108 / ml. Pre kontrolné a testovacie vzorky Salmonella Tifimurium 1 x 105 / ml: Zmrazená skúmavka obsahujúca Salmonella Tifimurium sa vybrala z mrazničky a nechala sa roztopiť pri izbovej teplote. Baktérie sa zriedili (1:10) v sterilnom fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom, aby sa dosiahla koncentrácia približne 5,5 x 107 / ml. 9 ul zriedeného materiálu sa pridalo k 5 ml každej z testovaných vzoriek, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 105 / ml.
Pre kontrolné a testovacie vzorky Salmonella Tifimurium 1 x 103 / ml:
Zmrazená skúmavka obsahujúca Salmonella Tifimurium sa vybrala z mrazničky a nechala sa rozmraziť pri teplote miestnosti. Baktérie sa zriedili (1: 1 000) v sterilnom fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom, aby sa dosiahla koncentrácia približne 5,5 x 105 / ml. 9 ul zriedeného materiálu sa pridalo k 5 ml každej z testovaných vzoriek, aby sa dosiahla koncentrácia približne 1 x 102 / ml.
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 1 gram Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 sa pridal do 9 ml sterilnej vody pri teplote miestnosti. Roztok sa miešal 5 minút, aby sa zabezpečila homogenita zmesi. 0,05 ml alebo 0,5 ml pripraveného roztoku sa pridalo k 5 ml vzorky.
Skúšobný postup:
Nasledujúce vzorky sa pripravili na Salmonella Tifimurium v každej koncentrácii kontrolných vzoriek. 3 skúmavky, každá s obsahom 5 ml mrkvovej šťavy. Testovacie vzorky: 3 skúmavky, každá s obsahom 5 ml mrkvovej šťavy plus 0,05 ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus 3 skúmavky, každá s obsahom 5 ml mrkvovej šťavy plus 0,5 ml Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Salmonella Tifimurium sa pridala do kontrolných a testovacích vzoriek opísaných vyššie. Všetky vzorky sa skladovali v chladničke (4 ° C) po dobu 24 hodín. Po ochladení sa stanovila bakteriálna koncentrácia pre každú zo vzoriek. Vykonali sa 10-násobné riedenia v sterilnom fosfátom pufrovanom soľnom roztoku. 0,1 ml každého zriedenia sa naočkovalo na TSA. Agarové platne sa inkubovali 24 hodín pri 37 ° C a potom sa spočítali; všetky množstvá boli zaznamenané ako CFU / ml. Všetky manipulované testovacie vzorky sa potom umiestnili na 48 hodín pri 37 ° C. Po inkubácii sa stanovila bakteriálna koncentrácia, ako je opísané vyššie.
Výsledky: tabuľka
S pozdravom Andrew Onderdonck
ACTA MICROBIOLOGICA BULHARSKO
List redakcii
Klinické skúšky s Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 u pacientov s Helicobacter pylori
Pacienti: Borislav Vladimirov, Yana Valerieva, Ivan Terziev, Kiril Petkov Gastroenterologické oddelenie, Univerzitná nemocnica „Queen Joanna – ISUL“, Sofia, Patologické oddelenie, Univerzitná nemocnica „Queen Joanna – ISUL“, Sofia ProViotik AD , Bulharsko
Úvod:
Cieľom tejto štúdie bolo preukázať účinok Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus GLB-44 u pacientov infikovaných Helicobacter pylori.
Metódy:
Sledovanie zahŕňalo 24 pacientov s priemerným vekom 45,46 ± 13,4 rokov, z ktorých 50% boli ženy. Všetci pacienti sú pozitívni na Helicobacter pylori. Infekcia sa detegovala rýchlym ureázovým testom (RUT), testom fekálneho antigénu, dychovým testom a histologickým vyšetrením alebo kombináciou všetkých vyššie uvedených. Terapia bola v minulosti neúčinná u šiestich pacientov a zvyšok sa predtým neliečil. Ezofagogastroduodenoskopia bola vykonaná u všetkých pacientov s nasledujúcimi výsledkami: 26,1% bolo diagnostikovaných s gastroezofageálnym refluxom, 65,2% – hiátová hernia, 87% – zmeny žalúdka, 4,3% – duodenálne erózie a 21,4% – aktívny dvanástnikový vred. Kurz vedený podaním Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (kapsuly a tablety), s dennou dávkou 15×09 v kombinácii s rabeprazolom 2 x 20 mg. alebo pantoprazol 2 x 20 mg. po dobu siedmich dní, po ktorých nasleduje Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 počas troch dní v rovnakom dávkovaní (15 x 109). Všetci pacienti boli 43 dní po liečbe podrobení kontrolnému testu na antigén stolice na Helicobacter pylori.
Výsledky:
U 22 pacientov (91,7%) bol kontrolný test na stolicu negatívny na prítomnosť Helicobacter pylori. U dvoch z pacientov (8,3%) sa v kontrolnej štúdii preukázala prítomnosť Helicobacter pylori. Obaja pacienti patria do skupiny predliečených pacientov, ktorí nemali pozitívny účinok po užití rôznych antimikrobiálnych látok. U ďalších štyroch pacientov patriacich do skupiny predliečených pacientov (z ktorých jeden mal autoimunitnú gastritídu) bol vykonaný negatívny test na prítomnosť Helicobacter pylori. Pacienti neuviedli vedľajšie účinky počas užívania Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus G-LB-44 (ProViotik®). Tento predbežný test na človeku ukazuje novú a účinnú metódu liečby pacientov s Helicobacter pylori bez antibiotík.
Záver:
Predbežné testy na ľuďoch demonštrujú novú a účinnú metódu liečby pacientov s Helicobacter pylori bez antibiotík.
Antifungálna aktivita a enzýmový profil
LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 Rositsa Tropcheva1, Yana Evstatieva1, Dilyana Nikolova1, Svetlana Saeva-Kondratenko2, Petko Petkov3, Kiril Petkov3 1Katedra biotechnológie, Biologická fakulta, Sofijská univerzita, Sofia 11 Sv.Klikov. 2Laboratories Genesis Ltd., Sofia, Bulharsko 2ProViotic Ltd., Sofia Bulharsko. E-mail: tropcheva12@mail.com
Úvod:
Plesne a kvasinky sú hlavnými kazivými mikroorganizmami zodpovednými za významné ekonomické straty a niekoľko zdravotných rizík v ľudskom potravinovom reťazci. Antimikrobiálna aktivita je dôležitým kritériom pre výber biologicky chránenej baktérie mliečneho kvasenia (LAB). Existuje niekoľko údajov o antifungálnej aktivite bulharskej baktérie mliečneho kvasenia, ako aj o jej enzymatickej aktivite. Za týmto účelom bol skúmaný účinok komerčne dostupného probiotika ProViotik® obsahujúceho kmeň LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 proti kvasinkám a detorálnym a toxikogénnym formám, ako aj prítomnosť kľúčových enzýmov.
Materiály a metódy:
LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 (vlastnená spoločnosťou Laboratories Genesis Ltd.) bol testovaný na protiplesňovú aktivitu proti piatim druhom plesní – Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium graminearum, Trichoderma viride a Penicillium claviforme, ako aj proti trom druhom kvasiniek Kromesia spromyx – . pomocou difúzie agaru. Enzýmový profil LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 bol stanovený pomocou API ZYM – miniatúrneho testu (BioMerieux, Francúzsko), podľa pokynov výrobcu. API pás bol „infikovaný“ kultúrou GLB44 po dobu 24 hodín, kultivovaný v MRS bujóne a potom inkubovaný pri teplote 37 ° C počas 4 hodín. Vyhodnotenie akcie je prezentované na škále 5 stupníc v závislosti od sýtosti farieb.
Výsledky:
Profil enzýmu LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 Obrázok 1. Profil enzýmu API ZYM LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44. Vyhodnotenie akcie je uvedené na škále 5 stupníc v závislosti od sýtosti farieb.
Obrázok 2. Obrázok miniatúrneho testu API ZYM (BioMerieux, Francúzsko) na LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44.
LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 má vysokú vysokú aminopeptidózu, kyslú fosfatázu a beta-galaktozidázu, enzymatickú aktivitu a úplný nedostatok aktivity spojenej s beta-glukuronidázou v hrubom čreve.
Antifungálny účinok LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44
Obrázok 3. Antifungálna aktivita L. Bulgaricus GLB44, stanovená na základe inhibície konečného rastu plesní po inkubácii pri teplote 29 ° C počas 5-11 dní. Výsledky sú uvedené ako percento inhibície. Testy in vitro odhalili širokú škálu antifungálnej aktivity. LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 úplne inhibuje (100%) rast Aspergillus flavus, Fusarium graminearym, Trichoderma viride, Penicillium claviforme.
Pokiaľ ide o Aspergillus Niger, bola pozorovaná nižšia inhibičná aktivita (66,6%). Obrázok 4. In vitro antifungálna aktivita LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 (analýza jednej vrstvy na agarovej platni).
Obrázok 5. Inhibičný účinok na kvasinky (Control-Fungosatin, 1 000 000 U / ml) ProViotic® preukázal silnejšiu inhibíciu proti Saccharomyces cerevisiae ako komerčne používané antibiotikum Fungosatin. LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 neinhibuje kyselinu mliečnu Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus, čo je perspektíva budúceho použitia GLB44 v mliekarenskom priemysle.
Záver:
Preukázaný silný proteolytický účinok ProViotik® robí LACTOBACILLUS BULGARICUS GLB44 zaujímavým pre použitie pri výrobe antihypertenzívnych a imunomodulačných produktov, ako aj pri výrobe rôznych mliečnych výrobkov. Antifungálny účinok ProViotic® je sľubnou výhodou, ak sa predpokladá, že jeho potenciálne použitie v rôznych potravinárskych technológiách je ako biokonzervačný prostriedok v zdravých produktoch proti plesňovým infekciám.